Expérimentation
Pour procéder à cette expérience, nous avons suivi un protocole.
Quatre étapes sont importantes : Premièrement, la préparation des gels d’agarose. Ensuite le dépôt de l’ADN dans les puits du gel, puis la coloration et enfin l’observation des résultats.
Pour ce faire, nous avons besoin du matériel suivant:
- Une cuve à électrophorèse ADN contenant un moule
- Une alimentation pour cuve à électrophorèse L’alimentation doit fournir une tension entre 70 et 110 V, plus la tension est élevée, plus la migration se fera rapidement mais moins la séparation des fragments d’ADN sera précise.
- Agarose - Tampon TBE (tampon de migration composé de Tris, d'acide borique et d'EDTA)
- Fragments d’ADN
- Colorants (Azure A ou bleu de méthylène).
- Micropipette
Plus éventuellement de l'eau et de l'alcool.
Ce matériel nous provient du "KIT ÉLECTROPHORÈSE ADN DU SUSPECT" de Sordalab (voir directement sur le site)
La première étape consiste à préparer le gel d’agarose.
Nous avons pesé environ 2 g de poudre
d’agarose type II et 250 ml de tampon
que nous avons mélangé et chauffé avec un
agitateur magnétique
pour dissoudre l’agarose dans le tampon qui sert à la
migration des fragments.
Nous avons ensuite versé le mélange dans un moule avec un peigne et nous l’avons laissé refroidir jusqu'à ce que le gel devienne consistant.Lorsque le gel a bien refroidi, nous avons, après avoir retiré le peigne, placé le moule dans la cuve que nous avons ensuite remplis de tampon.
Par la suite, nous avons remplis les puits un par un des différents échantillons d’ADN grâce à une micropipette. Nous ne savions pas quel échantillon etait le coupable et lesquels étaient les suspects.
Après avoir rempli tous le puits, nous avons laissé les fragments migrer pendant 40 minutes et nous avons trempé la gélose dans le bleu de méthylène.
Nous avons ensuite rincé la gélose avec de l'eau puis avec de l'alcool pour accélérer la décoloration et observer les résultats.
Résultats
Pour observer les résultats, nous avons ajouté des effets sur la photo pour mieux faire apparaitre les séquences d'ADN.
Pour comparer, il faut voir si les fragments sont à la même distance en partant des puits. En regardant nos résultats, on voit qu'en partant de gauche, le premier et le troisième résultat sont identiques, sachant que le premier puit est le témoin ! Nous avons pu alors identifier un individu grâce à l'empreinte génétique.
